PENETAPAN KADAR PROTEIN - Kjedahl (KIMIA AMAMI)

PENETAPAN KADAR PROTEIN

Metode                 : Kjedahl

Bahan                    : Susu, Kecap

Prinsip                   :

-   Gugus amino dari asam amino pembentuk protein diuraikan oleh H₂SO₄ pekat dengan katalisator CuSO₄. Karbon dan hydrogen dioksidasi menjadi CO₂ dan H₂O. Sebagian H₂SO₄ tereduksi menjadi SO₂, dan senyawa terakhir inilah yang mereduksi gugus amino menjadi amoniak, yang dengan H₂SO₄ berlebihan membentuk NH₄HSO₄.

-   Dengan penambahan NaOH pekat berlebihan terbentuk amoniak dan ditangkap dalam HCl 0,1 N berlebihan.

-   Kelebihan HCl 0,1 N dititrasi kembali dengan NaOH 0,1 N.Miligram protein dihitung sebagai banyaknya mg Nitrogen dikalikan faktor protein. 

 Reaksi                    :

-   Pada saat Destruksi

               H

                |                            H₂SO₄

  R        - C -        COOH  → CO₂ + H₂O + NH₂ + SO₂

               |                             Cu⁺⁺

              NH₂

NH₂                     →                  NH₃

NH₄ + H₂SO₄   →  NH4HSO4

-   Pada saat Desilasi

NH4HSO4 + 2 NaOH →Na₂SO₄ + NH₃ + 2 H₂O

-   Pada saat Titrasi

NaOH + HCl    →NaCl + H₂O

Reagensia           :

-   H₂SO₄ pekat              

-   Campuran Na₂SO₄, CuSO₄, dan selen                       

-   NaOH 50%

-   HCl 0,1 N

-   Indikator campuran MB : MR ( 1 : 1 )

-   Indikator PP 0,1 %

-   H₃BO₃ 4 %                    

Prosedur              :

-  Ditimbang seksama 1,0 gr sampel dimasukkan dalam labu kjedahl jangan sampai menempel leher labu.

-   Ditambah 5,0 gram campuran katalisator + batu didih + 15 ml H₂SO₄pekat.

-  Labu kjedahl diletakkan dalam kedudukan miring 45° diatas pemanas, ditutup dengan corong panaskan hati-hati dalam almari asam hingga buih habis, kemudian panaskan kuat-kuat

-  Hasil destruksi ditambah dengan 50 ml aquadest, kemudian pindahkan kedalam labu destilasi + 150 ml aquadest dingin + 3 tetes indicator PP 0,1%

-  Ditambah 50 ml NaOH 50% melalui dinding labu destilasi sampai merubah lakmus merah menjadi biru

-  Hasil destilasi ditampung dalam erlenmayer yang sudah dimasukkan H₃BO₃ 4% 50,0ml + 2 tetes indicator campuran

-   Destilasi sampai hasil destilasi ± 2 kali dari volume H₃BO₃ 4% (pH netral)

-   Destilasi dihentikan dan hasil destilasi yang semula berwarna hijau dititrasi dengan HCl 0,1N sampai warna biru kembali.

Perhitungan   : ml titrasi x N HCl x 0,014 x faktor protein x 100 %

                                                                gram sampel

                                 =………..%


Lihat juga penetapan-kadar-lemak-gravimetri
Lihat juga penetapan-kadar-gula-iodometri
Lihat juga penetapan-kadar-ethanol-dalam-minuman
Lihat juga pemeriksaan-garam-beryodium-penetapan
Lihat juga angka-penyabunan-acidimetri